Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者困难重重缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来胰脏自身抗躯到显现出来1HG哮喘病理病征的十分困难率在青少年时期就有不太好的刻画，多个胰脏自身抗躯无症状的青少年中的有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的青少年这一比例提高到84%。相较之下，占病理1HG哮喘一半以上的HG1HG哮喘的发病系统还很难获取确实的研究工作。

日渐多的人开始用于分段系统来定义1HG哮喘的十分困难：个躯在显现出来多种胰脏自身抗躯时转回第1阶段性，显现出来高血压异常时转回第2阶段性，显现出来病征时转回第3阶段性。一些多发胰脏自身抗躯无症状的个躯，在1期和2期，十分困难较太快，并发展为发病的1HG哮喘。我们之前刻画了一三组在首次检查到多种胰脏自身抗躯样本后至少10年无哮喘的亦然快十分困难者，这三组病患者人数少，但特征相当说明。随后，我们发现胰脏自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞核催化在十分困难缓太快的病患者中的基本不存在，但在全面性发病和长期存在的哮喘病患者中的很容易检查到。这可能会表明，与十分困难病患者相较，这些病患者自身致病的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但哮喘病患者存在一些系统有缺陷，其中的还包括对IL-2的催化能够降低。此外，哮喘病患者中的的效应CD4+T细胞核可能会对调节极具抵抗性，平庸为效应T细胞核的抑止减弱，纯净产生的Treg和躯外产生的抑止Treg，以及淋巴细胞个人经历的CD4+T细胞核中的IL-2催化减弱。本研究工作的目的是刻画了CD4+调节性T细胞核(Treg)在大群亦然缓太快十分困难者中的的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

原理：BOX研究工作是一项以人群为基础的两端研究工作，在21岁以下出院的病患者亲属中的检查1HG哮喘的危险因素。我们之前刻画了长期缓太快十分困难者的特征，他们保持良好多重胰脏自身抗躯无症状最少10年，但很难显现出来哮喘的病理病征，太快性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续保持良好无哮喘并愿意包括大量血液循环样本的缓太快十分困难者扩及T和B细胞核系统数据分析。在目前的研究工作中的，8名太快十分困难者(SP三组)，中的位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的胰脏自身抗躯无症状。所有的组织者都始终保持良好1HG哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗躯对某些淋巴细胞的无症状催化，然而，一名病患者已经始终保持良好2期至少6年，但很难显现出来病理病征，一名病患者被治疗为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析中的对该供躯来进行了单独指标。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核妖术和T细胞核抑止检验指标供躯中的Treg的高频率、平庸HG和系统。用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)来进行无统筹聚类数据分析，指标Treg平庸HG。

结果：与健康供躯相较，来自太快十分困难躯的潜意识CD4+T细胞核的统筹聚类表明，启动时的潜意识CD4+ Treg高频率提高，与抗生素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)解读提高有关。一名HbA1c下降的病患者与十分困难缓太快者和归一化的对照三组相较，Treg可知有所不同。系统数据分析表明，与健康供躯相较，来自缓太快十分困难躯的Treg介导的CD4+效应T细胞核抑止明显受损。平庸为对效应CD4+T细胞核CD25和CD134解读的抑止提高。

绘出1 了解的平庸HG数据分析表明，CD4+Treg亚HG在太快十分困难队列中的提高。由FlowSOM转化的Treg四楼，聚集在来自所有供躯的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标明物解读确认出10个元簇:潜意识T细胞核_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞核;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个节点代表一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在节点三组周围上色。每个节点中的的饼绘出回应单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出，以表明整躯标明解读。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)转化绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster装入直通绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞核(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞核(l)。浅蓝色带叔父代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检查。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用于CITRUS的预测模HG证实，Treg高频率的提高是十分困难缓太快的标志。PG门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)相较较SP组织者和归一化的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞核上的相异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的别具特色绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读来进行分离，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及供躯SP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的高频率概要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装入直通绘出;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读其中心着色，上标引人注意的簇被识别为SP和HD队列彼此间的不同。(j)装入直通绘出表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中的，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比例)。(k)直方绘出表明每个簇的平庸HG(黑色)和Treg标明一般来说解读与氛围解读(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中的标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检查

绘出3 与健康献血者相较，十分困难缓太快者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T细胞核元簇(潜意识T细胞核_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞核;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热绘出(sp606不还包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，表明直方绘出(c)和概要绘出(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检查，p< 0.07(浅蓝色)所有供躯还包括，p< 0.05(蓝色)供躯SP 606和归一化的HD不还包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR解读，从PG门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，表明直方绘出(e)和概要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检查

绘出4 来自缓太快十分困难的CD4+ treg细胞核控制效应CD4+T细胞核的能够降低。SP三组用蓝色的直通和带叔父回应，HD三组用黑色的直通和带叔父回应，浅蓝色的直通/带叔父回应供躯sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞核，培育出3天后来进行流式细胞核妖术检查。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说应的treg培育出(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育出。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比例。用于无症状对照(启动时的号召细胞核不含treg)计算抑止比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相较较测试

绘出5 效应CD4+T细胞核对缓太快十分困难的T细胞核转化的抑止更敏感。SP三组用蓝色的直通和带叔父回应，HD三组用黑色的直通和带叔父回应，浅蓝色的直通/带叔父回应供躯sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按通过观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞核，培育出3天后来进行流式细胞核妖术(CD25反染)和细胞核因叔父数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者一同培育出。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中的的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相较较测试

论证：我们得出的论证是，来自缓太快十分困难叔父的转化潜意识CD4+Treg在GITR解读中的获取了扩展到和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1HG哮喘风险个躯中的的异质性的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28